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實(shí)驗(yàn)室滅菌消毒怎么做更*?

更新時(shí)間:2022-04-19瀏覽:2658次

 一、消毒和滅菌的區(qū)別

  1、消毒(disinfectioninhospital):殺滅或消除醫(yī)院環(huán)境中媒介物上污染的病原微生物的過程.
  2、滅菌(sterilization):殺滅或去除外環(huán)境中媒介物攜帶的一切微生物的過程.包括致病微生物和非致病微生物,也包括細(xì)菌芽胞和真菌孢子.滅菌是個(gè)絕對(duì)的概念,滅菌后物品必須是*無菌的.即滅菌保證水平為106.
  二、高溫滅菌法
  高溫滅菌法是利用高溫使微生物的蛋白質(zhì)及酶發(fā)生凝固或變性而死亡,是應(yīng)用*泛且有效的滅菌方法。主要用于器械、容器、試劑等滅菌。
  (一)高壓蒸氣滅菌法
  為實(shí)驗(yàn)室常用的高壓滅菌鍋(右圖來自《微生物實(shí)驗(yàn)》一書)
  用高溫加高壓滅菌,不僅可殺死一般的細(xì)菌,對(duì)細(xì)菌芽胞也有殺滅效果,是可靠、應(yīng)用普遍的物理滅菌法。主要用于能耐高溫的物品,如金屬器械、玻璃、橡膠、耐高溫塑料制品及試劑的滅菌。高壓蒸氣滅菌器的類型和樣式較多,如:①下排氣式壓力蒸氣滅菌器是普遍應(yīng)用的滅菌設(shè)備,壓力升至102.9kPa,溫度達(dá)121~126℃,維持20~30分鐘,可達(dá)到滅菌目的。②脈動(dòng)真空壓力蒸氣滅菌器已成為目前的滅菌設(shè)備。滅菌條件要求:蒸氣壓力205.8kPa,溫度達(dá)132℃以上并維持10分鐘,即可殺死包括具有頑強(qiáng)抵抗力的細(xì)菌芽胞在內(nèi)的一切微生物。
  濕熱滅菌是目前實(shí)驗(yàn)室使用最為廣泛,滅菌的方法。目前濕熱滅菌的儀器技術(shù)上也非常成熟,安全系數(shù)較高。
  高壓蒸氣滅菌的注意事項(xiàng):
  包裹的物品不宜太大,一般應(yīng)小于30cm×30cm×50cm,大于該尺寸需要酌情延長(zhǎng)滅菌時(shí)間;
  1.高壓鍋內(nèi)的包裹不要排得太密,以免妨礙蒸氣透入,影響滅菌效果;
  2.對(duì)塑料制品不宜放置過于擁擠,以免發(fā)生形變;
  3.壓力、溫度和時(shí)間達(dá)到要求時(shí),指示帶上和化學(xué)指示劑即應(yīng)出現(xiàn)已滅菌的色澤或狀態(tài);
  4.銳性器械,如刀、剪不宜用此法滅菌,以免變鈍;
  5.瓶裝液體滅菌時(shí),如有塑料瓶蓋要適當(dāng)旋松瓶蓋,并用牛皮紙或紗布包扎瓶口;如有橡皮塞時(shí),應(yīng)插入針頭排氣,切記要保持瓶?jī)?nèi)外的連通,防止高溫膨脹爆裂;
  6.注明滅菌日期和物品保存時(shí)限,一般可保留1~2周;
  7.應(yīng)有專人負(fù)責(zé),每次滅菌前,應(yīng)檢查安全閥的性能,以防壓力過高發(fā)生爆炸,保證安全使用。
  (二)干熱滅菌法
  滅菌條件為:160℃維持2小時(shí);170℃維持1小時(shí);180℃維持30分鐘;高溫下可達(dá)滅菌要求。適用于易被濕熱損壞和在干燥條件下使用更方便的物品(如金屬、玻璃、陶瓷及凡士林紗布條等)滅菌。由于其對(duì)烤箱要嚴(yán)格要求(國(guó)內(nèi)產(chǎn)的烘箱質(zhì)量都有點(diǎn)懸),且大功率、高溫下危險(xiǎn)系數(shù)較大,一般不建議使用!特殊情況下,如需要滅活器械、容器中對(duì)于溫度超級(jí)穩(wěn)定的RNase時(shí),才考慮使用(其實(shí)也可以DEPC預(yù)處理器械、容器、溶劑等,然后濕熱滅菌!)。
  干熱滅菌法的注意事項(xiàng):
  1.對(duì)滅菌對(duì)象的理化性質(zhì)有一定了解,明確對(duì)象在高溫下的穩(wěn)定性;
  2.對(duì)設(shè)備的情況、參數(shù)有清醒認(rèn)識(shí),了解設(shè)備的溫度設(shè)計(jì)上限;
  3.專項(xiàng)供電,確保接入電路足夠負(fù)荷;
  4.滅菌過程中,相關(guān)人員要實(shí)時(shí)在崗監(jiān)管,不得離崗,如遇特發(fā)情況及時(shí)切斷電源!
  三、過濾除菌法
  過濾除菌法(Sterilizationbyfiltration)是用物理阻留的方法將液體或空氣的細(xì)菌除去,以達(dá)到無菌目的。常用于對(duì)熱不穩(wěn)定液體試劑的滅菌。一般來說孔徑為0.22μm的微濾膜即可有效地去除微生物達(dá)到除菌的目的,但該孔徑下無法去除體積極小的支原體或病毒顆粒。因此如果需要去除這些物體,就需要使用孔徑更小的納濾膜(孔徑可達(dá)20-50nm)。
  由于濾膜孔徑的大小和過濾的流速呈反比,因此我們通常在小孔徑濾膜之前使用大孔徑的濾膜進(jìn)行預(yù)過濾,從而防止微孔被過早的堵塞,保證過濾通暢進(jìn)行,進(jìn)而獲得更高的得率。
  在過濾除菌過程中要求過濾裝置和濾膜自身必須無菌。因此我們可以選擇購買已經(jīng)無菌預(yù)處理的一次性使用裝置(如Millipore的一次性針頭濾器),也可以選擇自行無菌處理,目前市售的濾膜通常可以采用高壓滅菌法除菌。
  注意事項(xiàng):
  在正式過濾前,必須進(jìn)行過濾系統(tǒng)的密閉性和濾膜的完整性測(cè)試。過濾過程要在等級(jí)A的潔凈室內(nèi)進(jìn)行(通常可在超凈臺(tái)完成)。
  四、紫外線滅菌
  紫外線的定義是波長(zhǎng)在10納米到400納米之間的電磁輻射。不過在實(shí)際應(yīng)用中,使用的波長(zhǎng)一般在100納米以上。波長(zhǎng)在315到409納米之間的UVA通常可以把皮膚曬黑,波長(zhǎng)280到315納米的UVB可以灼傷皮膚并增加皮膚癌風(fēng)險(xiǎn),波長(zhǎng)在200到280納米的UVC可以有效地殺滅細(xì)菌和病毒,而波長(zhǎng)在100到200納米之間的紫外線會(huì)被空氣中的氧氣吸收,所以只能在真空中或者至少是*無氧的環(huán)境里工作,也就不適合用于現(xiàn)實(shí)殺菌了。傳統(tǒng)的紫外殺菌選用254納米的波長(zhǎng)。
  從左到右分別是X-射線、紫外光。可見光、紅外光,光的波長(zhǎng)依次遞增。常用的殺菌波長(zhǎng)254納米位于紫外光中遠(yuǎn)紫外線(UVC)波段。圖片來源:tecnowattsnc.it
  當(dāng)紫外線被細(xì)菌或者病毒吸收之后,就會(huì)破壞DNA,從而使它們失去增殖能力。就殺菌結(jié)果而言,跟加熱或者用化學(xué)物質(zhì)處理是一樣的。
  紫外殺菌的能力除了跟波長(zhǎng)有關(guān),還取決于滅菌物被輻射到的能量。在選定的254納米波長(zhǎng)下,殺菌效果跟能量強(qiáng)度呈現(xiàn)一個(gè)拉伸過的S型。也就是說,在低能量下,殺菌效果很差,這是因?yàn)榧?xì)菌或者病毒跟人體一樣,對(duì)于DNA損傷有一定的修復(fù)能力。在照射能量低的時(shí)候,損傷的DNA被及時(shí)修復(fù),細(xì)菌和病毒就能夠繼續(xù)增殖下去。當(dāng)能量高到一定程度,DNA修復(fù)系統(tǒng)實(shí)在忙不過來了,DNA損傷急劇增加,宏觀上表現(xiàn)出來就是細(xì)菌或病毒被“殺死”了。超過這個(gè)能量強(qiáng)度,每增加一點(diǎn),滅菌能力都會(huì)大大增加。但是增加到一定程度,就進(jìn)入第二個(gè)平臺(tái)——再繼續(xù)增高能量,殺菌效果增加得也很少。這個(gè)滅菌效果上的“尾巴”可能是源于一部分微生物對(duì)于紫外線攻擊很頑強(qiáng),也可能源于有一部分被處理樣品無法被照射到。
  因?yàn)檫@個(gè)“尾巴”的存在,紫外殺菌難以實(shí)現(xiàn)加熱或者化學(xué)殺菌劑那么*的殺滅。通常把降低4個(gè)對(duì)數(shù)值作為“滅菌標(biāo)準(zhǔn)”,也就是還有萬分之一的細(xì)菌活下來。而鮮牛奶的巴氏殺菌——在72攝氏度下處理15秒——則通常是降低5個(gè)對(duì)數(shù)值,即最多只有十萬分之一的細(xì)菌存活。如果降低的對(duì)數(shù)值是12個(gè)以上,幾乎就沒有細(xì)菌能夠幸存了。
  不同的微生物對(duì)紫外線的敏感性不同,有的在較低能量強(qiáng)度下就會(huì)被大量殺滅,而有的則需要更高能量才行。以降低4個(gè)對(duì)數(shù)值為標(biāo)準(zhǔn),研究中檢測(cè)過的細(xì)菌有的只需要每平方米幾十焦耳的能量,有的則需要每平方米300焦耳以上。我們并不知道現(xiàn)實(shí)的食物中存在哪些細(xì)菌,又各有多少,所以總是把最頑強(qiáng)的那個(gè)作為目標(biāo),順便把其他的滅了。因此,紫外殺菌所用的能量強(qiáng)度需要在每平方米400焦耳以上。
  各種滅菌技術(shù)的滅菌效果都會(huì)受到滅菌物理化性質(zhì)的影響。比如加熱或者高壓滅菌,溫度、酸堿度和壓力都會(huì)有很大影響。而在紫外滅菌中,這些因素就不那么重要。紫外殺菌的關(guān)鍵是紫外線能夠達(dá)到細(xì)菌,所以穿透性是關(guān)鍵。諸如滅菌物的組成、固體含量、顏色等因素都會(huì)影響紫外線的吸收,從而影響它穿透的厚度,也就對(duì)殺菌效果有很大的影響。如果滅菌物均一、透明,紫外線的穿透性好,滅菌效果就會(huì)好;反之,如果滅菌物渾濁,那么紫外線就會(huì)被散射,能量在穿透中降低,滅菌效果就會(huì)比較差。
  總的來說,紫外線的穿透能力比較差,通常也就能穿透兩三厘米的厚度。但如果用在某些物質(zhì)短時(shí)間滅菌,效果還是很好的。
  注意事項(xiàng):
  1.選擇紫外燈時(shí),應(yīng)該仔細(xì)核對(duì)型號(hào)、適用范圍和注意事項(xiàng)。不要進(jìn)入開啟紫外消毒燈的室內(nèi)。千萬不要對(duì)著消毒燈驗(yàn)鈔或者觀察熒光,任何時(shí)候都不應(yīng)該直視紫外燈管。紫外燈應(yīng)該盡可能只在封閉空間內(nèi)小范圍使用,并避免不必要的暴露
  2.在使用過程中,應(yīng)保持紫外線燈表面的清潔,一般每?jī)芍苡镁凭耷虿潦靡淮危l(fā)現(xiàn)燈管表面有灰塵、油污時(shí),應(yīng)隨時(shí)擦拭。
  3.用紫外線消毒物品表面時(shí),應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射,且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量
  五、化學(xué)消毒滅菌
  (1)浸泡法選用殺菌譜廣、腐蝕性弱、水溶性消毒劑,將物品浸沒于消毒劑內(nèi),在標(biāo)準(zhǔn)的濃度和時(shí)間內(nèi),達(dá)到消毒滅菌目的。
  (2)擦拭法選用易溶于水、穿透性強(qiáng)的消毒劑,擦拭物品表面,在標(biāo)準(zhǔn)的濃度和時(shí)間里達(dá)到消毒滅菌目的。
  (3)薰蒸法加熱或加入氧化劑,使消毒劑呈氣體,在標(biāo)準(zhǔn)的濃度和時(shí)間里達(dá)到消毒滅菌目的。
  適用于室內(nèi)物品及空氣消毒或精密貴重儀器和不能蒸、煮、浸泡的物品(血壓計(jì)、聽診器以及傳染病人用過的票證等),均可用此法消毒。
  (4)噴霧法借助普通噴霧器或氣溶膠噴霧器,使消毒劑產(chǎn)生微粒氣霧彌散在空間,進(jìn)行空氣和物品表面的消毒。
  (5)環(huán)氧乙烷氣體密閉消毒法將環(huán)氧乙烷氣體置于密閉容器內(nèi),在標(biāo)準(zhǔn)的濃度、濕度和時(shí)間內(nèi)達(dá)到消毒滅菌目的。
  環(huán)氧乙烷是廣譜氣體殺菌劑,能殺滅細(xì)菌繁殖體及芽胞,以及真菌和病毒等。穿透力強(qiáng),對(duì)大多數(shù)物品無損害,消毒后可迅速揮發(fā),特別適用于不耐高熱和溫?zé)岬奈锲罚缇芷餍怠㈦娮觾x器、光學(xué)儀器、心肺機(jī)、起博器、書籍文件等,均無損害和腐蝕等副作用。本品沸點(diǎn)為10.8℃,只能灌裝于耐壓金屬罐或特制安瓿瓶中。
  注意事項(xiàng)
  1.易燃易爆品存放在陰涼、通風(fēng)、無火源、無電開關(guān)處。用時(shí)輕取輕放,勿猛烈碰撞。2.消毒時(shí),應(yīng)注意環(huán)境的相對(duì)濕度和溫度。鋼瓶需加溫時(shí),熱水不可超過70℃。
  3.對(duì)皮膚、眼及粘膜刺激性強(qiáng)的液體,如有接觸,立即用水沖洗。
  4.在有毒氣體消毒的操作過程中,如有頭昏頭痛等中毒癥狀時(shí),應(yīng)立即離開現(xiàn)場(chǎng),至通風(fēng)良好處休息。
  六、火焰滅菌
  是指用火焰直接燒灼的滅菌方法。該方法滅菌迅速、可靠、簡(jiǎn)便,適合于耐火焰材料(如金屬、玻璃及瓷器等)物品與用具的滅菌,不適合藥品的滅菌。
  最常見的火焰滅菌,酒精燈。
  為加熱接種環(huán)。
  注意事項(xiàng):
  1、酒精燈的燈芯要平整.
  2、添加酒精時(shí),不超過酒精燈容積的2/3;酒精不少于1/4.
  3、絕對(duì)禁止向燃著的酒精燈里添加酒精,以免失火.
  4、絕對(duì)禁止用酒精燈引燃另一只酒精燈.
  5、用完酒精燈,必須用燈帽蓋滅,不可用嘴去吹.
  6、不要碰倒酒精燈,萬一灑出的酒精在桌上燃燒起來,應(yīng)立即用濕布撲蓋.

 

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